紙色譜法又稱紙層析法，是用紙作為載體，通過分裂系的在同一介質中分散速度不同來分析樣品成分的色譜法，具有微量、快速、高效和敏捷度高等特點。從原理上來說，紙色譜涉及分配、吸附和離子交換等機理，相對復雜，但是分配機理起主要作用，因此紙色譜法屬于分配色譜。

由于紙色譜法適用于多官能團或高極性的親水化合物如醇類、羥基酸、氨基酸、糖類和黃酮類等化合物的分離檢驗，因此在巖礦分析與鑒定以及藥品檢測領域有較為廣泛的應用。

其中，用于藥品檢測時根據檢測內容的不同，采取的措施也不同。具體來說，當采用紙色譜法進行藥品鑒別時，供試品在色譜圖中所顯主斑點的位置與顏色(或熒光)，應與對照標準物質在色譜圖中所顯主斑點相同；進行藥品純度檢查時，取一定量的供試品，經展開后，按各品種項下的規定，檢視其所顯雜質斑點的個數和呈色深度(或熒光強度)；進行藥品含量測定時，將待測色譜斑點剪下經洗脫后，再用適宜的方法測定。

紙色譜法的準備工作

紙色譜法根據操作方法的不同又可以分為上行法與下行法，不過用到的儀器和材料大同小異。

進行紙色譜分析前應準備好展開容器(通常為圓形或長方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃蓋，應能密閉)、點樣器、色譜濾紙。其中點樣器需要保證能使點樣位置正確、集中，一般采用平口微量注射器或定量毛細管(無毛刺)；而色譜濾紙需做到質地均勻平整，具有一定機械強度不含影響展開效果的雜質，也不會與所用顯色劑起作用，以免影響分離和鑒別效果，必要時可進行處理后再用。

而在進行上行法時，需要在展開容器蓋上的孔中加塞，塞中插入玻璃懸鉤，以便將點樣后的色譜濾紙掛在鉤上，并除去溶劑槽和支架，并且使用的色譜濾紙長控制在 25cm左右，寬度則按需要而定，必要時可將色譜濾紙卷成筒形，點樣基線距底邊約 2.5cm。

進行下行法時，需要在支架架起展開容器，并用玻棒壓住色譜濾紙，同時，色譜紙按纖維長絲方向切成適當大小的紙條，使色譜濾紙上端能足夠浸入溶劑槽內的展開劑中，并使點樣基線能在溶劑槽側的玻璃支持棒下數厘米處，必要時，可在色譜濾紙下端切成鋸齒形便于展開劑向下移動。

紙色譜法的操作方法

進行紙色譜法時，應先將供試品溶解于適宜的溶劑中制成一定濃度的溶液，然后用微量注射器或定量毛細管吸取溶液，點于點樣基線上，一次點樣量不超過 10μl。

如果采用的是上行法，則應該在展開容器中加入適量展開劑，靜置至展開劑蒸氣飽和后，再下降懸鉤，使色譜濾紙浸入展開劑約 1cm，展開劑即經毛細作用沿色譜濾紙上升，除另有規定外，一般展開至約 15cm 后，取出晾干，按規定方法檢視。展開可以單向展開，即向一個方向進行；也可進行雙向展開，即先向一個方向展開、取出，待展開劑完全揮發后，將濾紙轉動 90°，再用原展開劑或另一種展開劑進行展開。亦可多次展開和連續展開等。

如果采用下行法，則應該將點樣后的色譜濾紙的點樣端放在溶劑槽內并用玻棒壓住，使色譜濾紙通過槽側玻璃支持棒自然下垂，點樣基線在壓紙棒下數厘米處。展開前，展開缸內用各品種項下規定的溶劑的蒸氣使之飽和，一般可在展開缸底部放一裝有規定溶劑的平皿，或將被規定溶劑潤濕的濾紙條附著在展開缸內壁上，放置一定時間，待溶劑揮發使缸內充滿飽和蒸氣。然后小心添加展開劑至溶劑槽內，使色譜濾紙的上端浸沒在槽內的展開劑中。展開劑即經毛細作用沿色譜濾紙移動進行展開，展開過程中避免色譜濾紙受強光照射，展開至規定的距離后，取出色譜濾紙，標明展開劑前沿位置，待展開劑揮散后，按規定方法檢測色譜斑點。